В обзорном отчете EMA по вакцинам Pfizer/BioNTech упоминалось, что производство активного вещества для вакцины BNT162b2 состоит из пяти ключевых этапов. Среди них молекулы РНК синтезируются из линейной ДНК с помощьюIn vitroТранскрипция (IVT)
С последующей многоступенчатой очисткой и фильтрацией.
В докладе рекомендуется, чтобы Спонсор внедрил стратегии тестирования для обеспечения адекватного микробного контроля исходного материала и чтобы буфер HEPES в буферной композиции не содержал РНКаз.
Что касается спецификаций вспомогательных веществ, в отчете говорится, что буфер для обработки этанола и лимонной кислоты должен контролироваться в соответствии с Европейской фармакопеей (Ph.Eur.), с буфером HEPES и спецификациями EDTA, установленными против активного вещества.
Исходя из вышеизложенного, Pfizer/BioNTech использовали буфер HEPES при производстве мРНК COVID-19 вакцин. В обзорном докладе также подчеркивается необходимость обеспечения того, чтобы буфер HEPES был свободен от РНЗ.
Основываясь на статье о составе LPX-мРНК, опубликованной BioNTech в 2016 году, буфер HEPES использовался в стоковом растворе мРНК компании. Можно предположить, что BioNTech использовала HEPES в качестве буферной системы для раствора РНК во время производства своей мРНК COVID-19 вакцины.
HEPES использовали в качестве буфера в растворе запаса мРНК, который может быть тесно связан с IVT РНК-полимеразы.
Об использовании буферной пары HEPES для реакции IVT сообщалось в исследовании еще в 1987 году. В исследовании РНК-полимераза инфекционного вируса кроветворного некроза (IHNV) была исследована для IVT при различных условиях реакции. Результаты показали, что буфер HEPES может максимизировать эффективность IVT по сравнению с буфером Трис.
Исследование показало, что по сравнению сТрометамин TRIS буферСинтез РНК был в три раза выше, когда в качестве буфера использовался HEPES (рис. 1а), а оптимальная концентрация буфера HEPES составляла 400 мМ.
Робин Шатток, директор департамента инфекционных заболеваний Имперского колледжа науки, технологии и медицины, является авторитетным экспертом в области мРНК-вакцин и работает в тесном сотрудничестве с BioNTech, PNI и другими ведущими биофармацевтическими компаниями. Его команда опубликовала статью об оптимизации IVT саРНК в 2021 году и заявила, что использование 40 мМ HEPES в качестве буфера для реакции IVT способствует более высокой эффективности IVT. Вывод был сделан путем скрининга и исследования основных факторов, влияющих на IVT саРНК.
Согласно статье о составе LPX-мРНК, опубликованной BioNTech в 2016 году, буфером, используемым в стоковом растворе мРНК компании, был HEPES. В исследовании RNA-LPX был подготовлен путем приготовления исходного раствора РНК 1 мг/мл с использованием буфера HEPES.
Согласно соответствующей литературе, HEPES имеет преимущества в качестве буфера для реакции IVT, что, по нашему мнению, является причиной, по которой BioNTech использует буферную пару HEPES в качестве буферной системы для исходного раствора мРНК.
1. pKa HEPES очень мало зависит от температуры, а pH мало меняется в зависимости от температуры.
2. Свойства стабильны. HEPES, с одной стороны, не комплексуется с другими ионами и не влияет на другие ионные функции; с другой стороны, присутствие других ионов не влияет на буферную способность HEPES.
3. pH в клеточной культуральной среде в основном поддерживается бикарбонатом и 5% CO.2В среде. Когда клетки находятся в открытой среде, CO2Побег может привести к быстрому повышению pH за физиологический диапазон, но это не такUe для носителя дополнен буферными парами HEPES.
4. HEPES не может легко пересекать биопленки и не мешает биохимическим реакциям внутри клеток.
1. Из-за присутствия пиперазина, H2О2Образуется, когда HEPES подвергается воздействию света, который является токсичным для культивируемых клеток или других биологически активных веществ. HEPES не следует использовать в сочетании с окислительно-восстановительными веществами. HEPES в качестве буфера следует использовать вне прямых солнечных лучей.
2. HEPES обычно используется в концентрациях 10-25 мМ в биохимических продуктах. Он обладает слабой буферной способностью, когда концентрация ниже 10 мМ, и может оказывать токсическое действие на некоторые клетки, когда концентрация выше.
ООО АВТПоставляет треалосе парентральн-степени, сахарозу, буфер ТРИС/ТРИС-ХКл, буфер ХЭПЭС и другие биопротектанты и решения буфера на постоянной основе. НашиДНКаза & свободный от РНКасеПродукты парентерального класса со сверхнизким содержанием эндотоксина производятся в соответствии с действующим GMP и зарегистрированы как в Китае, так и в Америке, что соответствует стандартам фармакопеи основных стран. С помощью нашей продукции мы вносим свой вклад в производство и регистрацию в Китае и/или других странах рекомбинантных белковых вакцин, мРНК вакцин, аденовирусных векторных вакцин, липосом, одинарных и двойных антител, АЦП и других биологических препаратов!
Ссылки:
1. ГАЕЛЬ КУРАТ * т, ЛЕОНГ Дж. К. Транскрипция in vitro вируса инфекционного гемопоэтического некроза, рыбьего рабдовируса [J]. Журнал общей вирусологии, 1987(68): 1767-1771.
2. Самнуан К, Блэкни АК, Маккей ПФ, Шатток RJ. Разработка экспериментов in vitro Оптимизация выхода транскрипции самоусиливающейся РНК. bioRxiv; 2021.
3. Отчет об оценке EMA, общее название: COVID-19 вакцина мРНК (модифицированная нуклеозидом).
EN
jp 
ko 
fr 
es 
ru 
ms 
id 
bn 
